|
|
Oddělení proteinových
struktur Fyziologický
ústav AV ČR, v.v.i. Vídeňská
1083 142
00 Praha 4 –
Krč Česká
Republika |
|
|
|
|
Česky/English |
|
Skupina Dr. OBŠILOVÉ: |
|||
|
Naše skupina se zabývá strukturní biologií (vztahy
mezi strukturou a funkcí určitých skupin bílkovin), konkrétně se zaměřujeme
na proteiny, které se účastní přenosu signálu v buňce. |
|||
|
PROBLEMATIKY: |
|||
|
Studium struktury a funkce 14-3-3 proteinů a
jejich komplexů Náš výzkumný tým se zabývá studiem 14-3-3
proteinů, což jsou konzervované regulační molekuly exprimované ve všech
eukaryotických buňkách. Poprvé byly izolovány z hovězího mozku a jejich
zajímavé jméno „14-3-3“ se odvíjí od jejich migrace na DEAE
celulosové chromatografii a škrobové gelové elektroforéze. 14-3-3 proteiny
mají schopnost se vázat na funkčně rozdílné signální proteiny, včetně kináz,
fosfatáz a transmembránových receptorů a tím
pozměňovat jejich funkci. Tyto
proteiny se účastní signální transdukce, kontroly buněčného cyklu, kontroly
metabolismu a apoptózy díky strukturním a funkčním
změnám řady svých vazebných partnerů. Do této doby bylo nalezeno více než 300
vazebných partnerů. Hlavním cílem těchto projektů je mechanistické pochopení
funkce 14-3-3 proteinu v regulaci vybraných 14-3-3 vazebných partnerů:
např. interakce 14-3-3 proteinu s transkripčními faktory FOXO,
s enzymem Tyrosinhydroxylasou, s ASK1 kinasou, s regulátorem G-proteinové signalizace
RGS3, s fosducinem. V současné době také
studujeme dvě kvasničné isoformy 14-3-3 proteinu (Bmh a Bmh2), a dále interakci Bmh
s neutrální trehalasou Nth1 v kvasinkách. |
|||
|
Specifická trehalasová
aktivita pNth1 WT a jednotlivých mutantů po aktivaci Bmh1 in vitro
Veisova
et. al., Biochemical Journal 2012, 443:663-670. |
Struktura lidského 14-3-3 proteinu (isoforma zeta) s namodelovaným C-terminálním segmentem
Veisova
et. al., Biochemistry
2010, 49(18):3853-61. |
Distribuce sedimentačních koeficientů, c(s),
pro Bmh1 a Nth1 samotné a v komplexu
Veisova
et. al., Biochemical Journal 2012, 443:663-670. |
|
|
METODY |
|||
|
•
Biochemický přístup (exprese rekombinantních proteinů, cílená
mutagenese, enzymová kinetika) •
Biofyzikální přístup (fluorescenční spektroskopie, analytická
ultracentrifugace, isotermální titrační
kalorimetrie, povrchová plasmonové resonance, vodíková výměna, hmotnostní
spektrometrie, modelování proteinových struktur, rentgenová krystalografie,
molekulárně dynamické simulace). •
Krystalografie vybraných komplexů → Tyto metody nám umožňují lépe pochopit
detaily, jak je regulována aktivita a funkce protein-proteinových komplexů.
|
|||
|
VYŘEŠENÉ
STRUKTURY |
|||
|
DNA-vazebná doména forkhead
transkripčního faktoru FOXO4
navázaného na DNA |
RGS doména
RGS3 proteinu (regulátor G-proteinové signalizace) Rezabkova
et. al., Journal of Structural Biology 2010,
170, 451-461. |
||
|
|
|
||
|
Skupina Ing. TEISINGERA: |
|||
|
Studium cytoplasmatických domén TRP kanálů Přechodné potenciálové kanály (TRP) jsou rodina neselektivních iontových kanálů
zodpovědných za monovalentní a divalentní příliv
kationtů do buněk. Členové této rodiny se účastní mnoha
smyslových procesů jako vidění a slyšení u bezobratlých nebo u savců kontrola
teploty, mechano- a chemo-vnímání. TRP kanály mohou být rozděleny do sedmi podrodin
s ohledem na jejich primární strukturu: TRPV, TRPC, TRPA, TRPM,
TRPP, TRPML a TRPN. Všechny mají
6 transmembránových helixů (S1–S6) a kličku
tvořící pór mezi S5 a S6, s různými
velikostmi intracelulárních amino a karboxy konců, tvoří tetramery. Jak N-, tak C-koncové intracelulární domény se skládají z mnoha různých domén, které
jsou zodpovědné za vazbu různých sloučenin, které pak regulují funkci kanálů. Naším cílem je hledat možná vazebná místa pro ATP,
kalmodulin a PIP. |
|||
|
|
|||
