Laserový skenovácí konfokální mikroskop s superkontinualnim “bilym” laserem a dvoutonovou excitaci Leica SP8 WLL MP

 

Mikroskop: invertovaný mikroskop Leica DMi8 s binokulárním nástavcem, motorizovaným kondensorem a bočním portem pro připojení kamery na snímání preparátů v procházejícím světle, DIC a fluorescenci; motorizovaný skenovací stolek (rozsah posuvu 127 x 83mm, možnost snímání ROI, TileScan, Mark&Find) s vložkou Super Z Galvo (rozsah z-posuvu 1500 µm).

 

Základní sada objektivů:

• HC PL FLUOTAR (FLUOR) 5x/0.15 NA, WD=10 mm;
• HC PL FLUOTAR (FLUOR) 10x/0.30 NA, WD= 11 mm;
• multiimerzní objektiv HC PL APO 20x/0.75 NA, IMM CORR CS2, WD=0.67 mm, DIC;
• HC PL APO 63x/1.20 NA W CORR CS2, WD=0.30 mm, DIC;
• HC PL APO 63x/1.40 NA OIL CS2, WD=0.14 mm, DIC.

(po dohodě lze použít i objektivy užívané na jiných mikroskopech firmy Leica Microsystems)

 

Konfokální hlava UV-VIS-IR: akusticko-optický dělič paprsků (AOBS), spektrální detektor s laditelným emisním rozsahem 350 nm - 800 nm.

 

Lasery: DMOD 405nm (50 mW), multičárový Ar laser 458 - 476 - 488 - 496 - 514 nm (65 mW), pulsní superkontinuální “bílý” laser druhé generace WLL2 s rozsahem vlnových délek 470 – 670 nm (cca. 1,5 mW na každou čáru) s možností využití až 8 vlnových délek současně pomocí AOBS (nastavitelné v krocích 1 nm) s nezávislým ovládáním výkonu každé vlnové délky pro rychlou modulaci intenzity laseru pomocí 8-kanálového akusticko-optického laditelného filtru (AOTF); pulsní infra-červený laditelný laser Chameleon Ultra I (Coherent Inc., CA) s rozsahem vlnových délek 690 – 1040 nm, maximálním výstupním výkonem 4 W, pulsní frekvencí 80 MHz, šířkou pulsu ~140 fs a s ovládáním intensity laseru pomocí elektro-optického modulátoru (EOM) a atenuátoru.

 

Detektory: Interní (konfokální): 2x HyD spektrální detektory vysoce citlivé hybridní detektory s maximální kvantovou účinností 45% (při 500 nm) s rozsahem 400 – 720 nm s nízkým šumem a velkým dynamickým rozsahem, možnosti photon counting módu a gaitingu, možnost nastavovat offset a gain pro každý detektor zvlášť, možnost vybrat libovolné spektrum pro detekci a libovolné detekční okno; šířka okna od 1 nm; 2x PMT interní detektor s vysokou citlivostí, QE = 30% (při 500 nm), rozsah detekce od 400 do 800 nm, možnost nastavovat offset a gain pro každý detektor zvlášť, možnost vybrat libovolné spektrum pro detekci a libovolné detekční okno; šířka okna od 1 nm;

 

Externí (non-descanned): 2x vysoce citlivé HyD spektrální detektory (s rozsahem 400 – 720 nm) s nízkým šumem a s vysokým dynamickým rozsahem, možnosti photon counting módu a gaitingu; TLD – detektor pro snímání v procházejícím světle (BF) nebo DIC, použitelný současně s dalšími kanály (konfokálními a externími).

 

Komůrka pro snímání živých buněk: systém od firmy Oko-Lab s kontrolou teploty H301-T-UNIT-BL-PLUS (včetně ohřívače objektivů), koncentrace CO2 (0-20%) a kyslíku O2 (1-95%, hyperoxické podmínky až po zajištění dodání O2 do inkubátoru) CO2-O2 Unit-BL [0-20;1-95], zavlhčovací jednotkou a komůrkou H301-K-FRAME s možností perfúze, vložkou GS35-M (pro 1x 25x76 mm podložní sklo a 2x 35 mm Petriho misky) s magnetickými držáky vzorků.

 

FLIM modul: jednokanalový TCSPC systém pro snimáni časově koreloványch jednotlívych fotonů v jedném spektrálním kanalu Simple-Tau-150-D1 (Becker & Hickl GmbH, Berlin, Německo). Ultrarychlý systém registraci jednotlivých fotonů na bázi SPC-150 modulu se sklada z PCI-box’u, ovladače detektoru DCC-100 a chlazeného velmi rychlého detektoru PMC-100-1 na bázi fotonasobiče (s rozsahem detekci 300 – 820 nm) a kontrolního noutbuku. Na snimani FLIM dat se daji pouzit i standartni externí hybridni detektory Leica HyD NDDs (2x), umištené na bočním portu invertováného mikroskopu Leica DMi8.

 

Software: LAS X pro ovládání stativu mikroskopu, automatizované snímání obrazů a sérií obrazů (z-série, časosběrné série, spektrální λ-série a jejich kombinace) s použitím různých laserů včetně sekvenčního snímání.

 

SW moduly: Dye Finder, Live Data Mode, 3D Visualisation, Co-Localisation, MicroLab (pro FRAP, FRET, FLIP experimenty i ROI), FRAP Zoomer (pro FRAP na tandemovém skeneru).