| Anotace |
Lipidy plní v buňkách řadu funkcí, účastní se jejich vývoje i patologie. U lidí jsou mnohé choroby, např. kardiovaskulární problémy, obezita, nebo některé vrozené metabolické poruchy přímo spojeny s lipidy. Biologické funkce a aktivity lipidů jsou závislé na jejich struktuře. Většina lipidů obsahuje řetězce mastných kyselin, u nichž počet dvojných vazeb, jejich konfigurace a pozice v řetězci významně ovlivňuje jejich biologickou aktivitu. Tradiční metodou pro určování poloh dvojných vazeb je plynová chromatografie s hmotnostní detekcí (GC/MS). Tato metoda je velmi účinná, avšak ve většině případů je nutné směsi lipidů hydrolyzovat, aby se uvolnily mastné kyseliny. Tím se však ztrácí informace o strukturách původních lipidů, tj. jakým způsobem a v jakých kombinacích v nich byly mastné kyseliny vázány.
Cílem tohoto projektu je vyvinout postupy pro určování poloh dvojných vazeb u standardů intaktních lipidů, bez nutnosti jejich hydrolýzy, s využitím hmotnostní spektrometrie s ionizací za atmosferického tlaku (ESI nebo APCI). Dvojné vazby v lipidech budou derivatizovány různými postupy (hydroxylace, epoxidace, alkylthiolace, halogenace apod.) a u reakčních produktů budou studována hmotnostní spektra. Deriváty, které budou mít ve svých spektrech ionty indikující pozici dvojných vazeb budou vybrány a dále použity pro řešení vybraných biologických problémů. Pro vybrané deriváty budou vypracovány HPLC/MSn metody, které umožní identifikaci poloh dvojných vazeb u směsí přírodních lipidů. K dispozici jsou HPLC a UHPLC systémy s hmotnostním detektorem umožňujícím měřit při nízkém (iontová past) nebo vysokém (orbitrap) rozlišení. Derivatizační reakce budou otestovány na neutrálních lipidech (uhlovodíky, estery, acylglyceroly) a polárních lipidech (fosfolipidy, glykolipidy).
|
