Hybridizační metody studia nukleových kyselin
Hybridizační metody studia nukleových kyselin patří mezi základní techniky molekulární biologie. V článku jsou přiblíženy principy hybridizace nukleových kyselin a popsány rozdíly mezi jednotlivými metodami (Southernův přenos u DNA, „northernový“ přenos u RNA).
Nucleic acid hybridization techniques belong to the basic methods used in molecular biology. In this review the principles of nucleic acid hybridization as well as methods based on solid support hybridization (Southern blot, northern blot) are discussed.
Analýza exprese kvasinkového genu TIP1 metodou northern blot. Celková RNA byla po izolaci z buněk rozdělena na elektroforéze (levá část obrázku). Nahoře jsou dobře patrné pruhy ribozomální RNA, v dolní části méně zřetelné pruhy malých buněčných RNA. Molekuly mRNA jsou různě dlouhé a tvoří pouze část celkové RNA, takže není možné rozeznat pruhy jednotlivých mRNA (šipka označuje přibližné místo výskytu TIP1 mRNA). Pomocí techniky northern blot je možné zobrazit pruh konkrétní mRNA a získat informace o jejím množství (pravá část obrázku). V případě analýzy exprese genu TIP1 je vidět, že s přibývajícím stářím kvasinkových buněk (zleva doprava – 3, 4, 5, 7 a 10 dní) postupně klesá množství jeho mRNA (výsledky laskavě poskytl V. Šťovíček). Orig. M. Kuthan / Orig. M. Kuthan
